介绍
在制药和医疗器械生产过程中，对污染物样品的监测是一个关键步骤。内毒素存在于革兰氏阴性细菌的细胞壁中，是一种常见的污染物，可引起发烧、炎症、头痛、恶心，甚至死亡。内毒素的常规检测方法是鲎试剂溶酶法 (LAL)，核心成分由鲎的血液中提取而来。在内毒素存在的情况下，LAL 通过酶促级联凝固，可以通过比浊法或显色法定量 ( 图 1A )。这些方法涉及多个酶的步骤，并取决于鲎的可用性。
2021 年 2 月 5 日，国家林业和草原局、农业农村部发布公告，调整后的的《 国家重点保护野生动物名录 》正式发布，将我国分布的鲎科动物 ( 中国鲎、圆尾蝎鲎 ) 升级为国家二级保护动物。中国药典 2020 年版 9251 细菌内毒素检查法应用指导原则中指出，目前新的细菌内毒素检测方法不断出现，以适应特殊品种细菌内毒素检查的需要，或减少鲎试剂的使用量。如重组 C因子法 ( 见附 )、微量凝胶法等。
附：重组 C 因子法
C 因子是鲎试剂中对细菌内毒素敏感的蛋白，能够选择性识别内毒素。重组 C 因子是一种人工合成的 C 因子，它被细菌内毒素活化后，可与荧光底物作用产生与内毒素浓度成比例的荧光信号。
仪器型号
• SpectraMax M2e 多功能微孔板读板机
• SpectraMax M5e 多功能微孔板读板机
• SpectraMax i3x 多功能微孔板读板机
• SpectraMax iD3 多功能微孔板读板机
本法系依据反应混合物中的内毒素浓度和其孵育终止时的荧光值之间存在量化关系来测定细菌内毒素的含量，本法为终点荧光法。依据检测原理，本法不存在 G 因子旁路干扰，具有较高的专属性，因此 适合于含有 β- 葡聚糖 干扰的样品检测；本法所用试剂不含有 B 因子和凝固酶原、凝固蛋白原等，因此，含有对上述物质抑制或增强作用的样品适合使用重组 C因子法。重组 C 因子法实验需采用荧光酶标仪，其激发和发射波长参数参照试剂的使用说明书，激发 / 发射波长一般为380nm/440nm，检测温度一般为 37℃ ±1℃ 。
材料
• Rhinogen® 重组 C 因子内毒素检测试剂盒 ( 产品货号 : RAF-01 )
• 一次性无热源安瓿瓶 (Rhinogen)
• 无热源、低吸附移液头 (QSP#Cat.TF112-1000-Q, TF140-200-Q)
• 一次性无菌无热源 96 孔白板 (Nunc#Cat.136101)
• 细菌内毒素国家工作标准品
• SpectraMax® M2e 多功能微孔板读板机 (Molecular Devicescat. #M2e)
• SpectraMax® M5e 多功能微孔板读板机 (Molecular Devicescat. #M5e)
• SpectraMax® i3x 多功能微孔板读板机 (Molecular Devicescat. #i3x)
• SpectraMax® iD3 多功能微孔板读板机 (Molecular Devicescat. #iD3)
• SoftMax Pro 软件 (Molecular Devices)